推 ranilla:methanol? 05/13 14:23
推 DFS:semi-dry?我是用170mA 60min 溼式transfer則是250mA 1Hr 4度C 05/13 14:34
→ DFS:PVDF membrane 要先用MeOH活化 NC membrane好像就不用 是嗎? 05/13 14:35
推 raxjimmy:恩 NC只要先浸泡一下transfer buffer就可以了 05/13 14:38
推 DFS:嗯嗯 BTW .45um的抓不到12kD以下的蛋白 小分子得換.2的 05/13 14:40
→ georgeby:不好意思 我第三次是用NC membrane 也有先泡tran buffer 05/13 15:35
→ georgeby:不過我想prestained marker都有tran過去 (最小10 kD) 05/13 15:36
→ georgeby:所以我不曉得是什麼原因 05/13 15:36
推 DFS:Transfer buffer有沒有加MeOH? 05/13 20:45
推 blence:都沒有人注意到TBE？ 05/13 22:05
推 raxjimmy:我是用CAP或Towbin轉 但是原PO既然standard能轉過 我想應 05/13 22:27
推 raxjimmy:該不會是buffer的問題吧? 除非轉完染膠 膠上也可以染到St 05/13 22:28
推 DFS:TBE...嗯 轉DNA!? 05/14 11:14
推 raxjimmy:western應該是protein吧 還有如果你用的不是gradientPAGE 05/14 12:31
推 raxjimmy:分子量會影響轉膜的速度喔 時間可能要靠抓的 05/14 12:33
推 littlelizard:分子量多少阿? 可以把轉印buffer裡的甲醇提高到15% 05/15 02:07
→ littlelizard:PAGE要泡一下轉印buffer membrane也要泡一下甲醇 05/15 02:08
→ littlelizard:至少10 min吧 可讓大和小分子轉印速率不要差太多 05/15 02:09
推 raxjimmy:樓上說的方法是一般固定%數的膠可以用的嗎??? 05/15 13:26
推 littlelizard:我不是很確定 我也不知道原理是什麼 但我可以告訴你 05/15 13:59
→ littlelizard:我的條件 我跑15% 分子量 15 kD 50以下幾乎可以一起 05/15 14:00
→ littlelizard:轉過去 大分子的至少可以轉一半左右吧 05/15 14:01
→ littlelizard:然後我是用0.45um的PVDF 0.22um太貴Lab又很少人用 05/15 14:03
推 tsubasawolfy:轉高分子提高SDS 低分子MeOH 05/15 14:04