Re: [徵求] Stripping Buffer配方

[lenti (啄木鳥)]

抗原抗體complex要解離取決於兩個因素:

一是抗體抗原間的親和力.

二是環境因素. 環境中的電解質, 溫度, 離子強度.

因此, 要使已結和的抗原抗體complex解離, 我們會用不同的stripping buufer

來製造解離的環境.

下列 stripping buffer I, 就是原Po提到的需要加熱的方法,

增加分子間熱動能, 使已結合的complex分離.

他的缺點除了臭之外, 由於溫度變化易使蛋白變性.

Stripping Buffer I
        Amount                  Final Conc.
Tris    3.1 ml (1M stock)       62.5 mM
SDS     1 g                      2%
beta-mercaptoethanol    0.34 ml 100 mM

Dissove SDS in 40 ml water, add the Tris, adjust PH to 6.8, add
beta-mercaptoethanol, and then dilute to 50 ml with water.


第二種方法, 就是原po要的不用加熱的方法, 也是commercial常用的配方.

改變環境中的PH和離子強度促進Ab-Ag complex的解離.

也就是在純化Antibody IgG 技術中用的 elution buffer.

配方很簡單, 如下:

(SDS, Tween-20 不加也可以,但重點在以HCl調PH到2.0~2.2)

Stripping Buffer II
            Amount  Final Conc.
Glycine      1.5 g   0.4 M
SDS          0.1 g   0.2%
Tween 20     1 ml    2%

Dissove Glycine and SDS in 40 ml water, adjust PH to 2.2, add Tween-20, and
then dilute to 50 ml with water.


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 61.31.132.76
推 ranilla:強鹼可以嗎？
推 loham:正需要  推  不喜歡2ME的配方  換個方法  嘿嘿
推 gamer123:有建議的反應時間嗎?...謝謝
推 imbi:謝啄木鳥大大詳盡解說與建議，受教了
→ lenti:反應時間,15~30分鐘, 最短我試過5分鐘, signal就消失了.
→ lenti:但如果第一次的訊號較強,確實會有strip不完全的情形.
→ lenti:0.2N NaOH我沒試過,如果current protocol有,理論上也可行.
推 HXZ:兩個都用過..比較喜歡用第一種...不過時間溫度要控制好