[求救] 補平之後的ligation

[hosaka (比別人程度差就要更努力!)]

補平和ligation之後 都只長少少的一兩顆

今天多了一點 只長五顆  可是都挑不到

想請問

補平之後的ligation有啥秘方嗎??可以讓我接多一點~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.109.65.34
推 lssunti:單邊補平？二邊？ ligation多久？溫度？
→ hosaka:單邊補平 一邊是XhoI ligation一小時 室溫
推 tsubasawolfy:品質高的competent cell..
推 bluecsky:ligation RT 1hr...你對你的ligase真有信心..
→ bluecsky:一邊blunt end 一邊sticky end應該不會太過難接
→ bluecsky:試試看把ligation時間拉長點看看 可考慮4度冰箱擺隔夜
→ bluecsky:當然competent cell的品質影響也是很大 也可以試試
推 conective:室溫ligation還ok呀 不然試試16度overnight
→ seal0413:How long did you treat your DNA by klenow fragment??