推 afunafun:promoter前面應該不只有一個切點 原PO可再查一下 07/10 21:05
→ afunafun:若沒有就先用EcoRI整段切下 接到其他質體上 07/10 21:07
→ afunafun:做切點置換 增加切點總類 再送回原質體 07/10 21:09
→ bee921:謝謝a大的指教~接質體增加切位是個好方法 07/12 13:52
推 lucidol:將後面的RE切位以定點突變換掉使之為其他序列?? 07/16 18:14
現在在做有關於Promoter方面的研究
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原本根據之前學長自己重新構築的螢光質體設計帶有 EcoRI及NcoI切位的primer
獲得promoter序列後做了Restriction double digest
在學長構築的質體(同樣可以用酵素把他舊有的promoter切下，打算接我自己的)
但卻發現自己先前沒注意到還有一個EcoRI切位剛好完整的把EGFP切掉
也就是
-----EcoRI-舊Promoter-NcoI-EGFP-"EcoRI"-----(環狀)
自己有試過用partial digest切過~沒用的很好
(但每次都這樣有點麻煩)
所以想徵求可接promoter的螢光質體
像是pmaxFP-yellow-PRL vector等
或是有好的解決方法
謝謝!
Orz
(有爬文看到突變序列產生新的切位或改變切位，想說還是先請教各位)
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