[求救] siRNA knockdown後的functional assay

[snkre (123)]

        siRNA 是買Dharmacon的smart pool

        大約在48hr target gene 的 mRNA 約可 knockdown 50%

        若要做functional assay

        ex:cell proliferation(MTT)....等等

        時間點勢必要再拉長,但cell line會不斷的proliferation

        但 隨著cell的proliferation 有被knockdown的比例就變少了

        不知各位是如何去assay siRNA knockdown之後的function

        (主要是與cell proliferation相關,如MTT,colony..等,

         而先前用加藥的實驗發現某些基因會down regulation)

        還是用lentivirus的knockdown系統比較好

        謝謝!!

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※ 編輯: snkre           來自: 140.112.130.37       (07/10 22:03)
※ 編輯: snkre           來自: 140.112.130.37       (07/10 22:08)
→ acs1:之前進行基因knowndown的分析都是選殖出stable knowndown細胞
→ acs1:transient的方式比較沒辦法assay唷
推 vancent:TRANSIENT時間點抓好照做啊~只是STABLE是最理想的而已
→ vancent:PAPER也很多都是TRANSIENT做的~沒什麼不可以
→ snkre:可以每隔2-3天用追加siRNA的方式嗎?paper中是沒有特別提到
→ rimeni:追加可.要記得做realtime PCR確定knockdown efficiency.