→ pam7752:sigma有出一款kit 是用agarose gel分離 11/24 20:58
先說一下實驗目的: 是要看我做的mAb會不會認immunogen
因為效果一直沒有很好~連positive control的抗體都沒有移出來
所以現在要先確定control組的抗體
以及我們的方法跟操作上有沒有問題
我是使用感染A virus 的細胞
然後用 anti-A virus 的 mAb去當一抗
二抗是用goat-anti mouse FITC (也有用過Alex Flour 488)
我的negative control 是用沒有感染的細胞~染一樣的一抗二抗
可是做出來的結果
兩種細胞是差不多的
甚至感染後的pick 比正常細胞還往內
我做過很多次了
也有試過用電穿孔方式把病毒plasmid 送到細胞內
再拿去跑
結果也一樣 = =
然後我們想說~ 會不會這個抗體辨認細胞本來就是比較不ok
(但它做ELISA跟western 都很ok)
那如果不要用細胞~
用protein G先把抗體抓下來
detector 用 A virus ~然後一抗~二抗
這樣會不會效果好一點
可是我找了很多paper
都還沒看到有人用protein G去跑 flow
再來我也很擔心~ protein G 那麼大~會不會把flow的管子塞住
想請問有沒有人有做過相關的實驗?可以給我點建議嗎 謝謝
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