作者blueashin (tRoMboNe pLaYer)
看板Biotech
標題[求救] RNA濃度太高 會引響RT效率嗎?
時間Sat Dec 19 18:08:17 2009
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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想要請教板上的各位先進
我使用的是 promega的AMV reverse transcriptase
之前使用上沒有問題
但是這一次不知道為什麼 轉完RT之後
只能放出18SrRNA的片段
卻沒辦法放出目標基因
這組primer基本上已經用過很多次了 原則上不會有問題
仔細一想 唯一有問題的地方似乎就是 RNA濃度有點高
2046ng/ul
我總共用了10ul也就是20460ng 然後只加1ul的AMV不知道
有沒有人碰過類似的問題~
感激不盡
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.241.123.131
→ NKTcell:建議可以先看看RTase的說明書~ 12/19 18:29
→ jazzdevil:RT之前不是應該知道RNA濃度 再定量去轉嗎 12/20 00:38
推 singren:2046還好吧..20460就有點高了... 01/05 12:34
→ singren:primer是random還是target primer 還是oligo dT? 01/05 12:36
→ chaunen:2ug剛好 01/12 21:59