[求救] competent cell

[iwenyo2 (柚子)]

最近老師需要10的8~9次方的competent cell
但我怎麼做最好都只能到5*10的6次方
想請問 板友
大家養菌的方式跟OD值
看版 及書 大部份都養2小時就可以到0.5~0.6
但我養2.5小時卻只能到0.3~0.4
還有假如養 100ml 用250ml 養是不是會導致氧氣不足
我是用PSI broth (參考國外的protocol) 看網路上大家好像都用SOB
老師說用 PSI borth就可以在培養過程中 細菌細胞膜會變薄弱

另外 測效率的plasmid DNA 是否不能適用於不同的competent cell
因為我門實驗室用的competent cell有DH5a, ccdB, stbl3, HB101,JM109
但怎麼都做不好
拜託 高手教授我幾招

非常感謝!!!!!!

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◆ From: 61.230.79.188
推 cutilis:我們的protocol是有在subculture時加MgSO4
推 FUSION87:你罐子太小了 我們都養錐形瓶的1/5~1/4體積
→ FUSION87:ex.5L瓶養1.25L或1L
→ FUSION87:另外competent cell製作時的技巧會影響效率很大
→ FUSION87:基本上製作competent cell時，菌會很脆弱，所以不能太劇
→ FUSION87:烈，然後動作要快，要確實在冰上處理
→ naturer:用電的
推 hdf87ery:照openwetware上的TOP10方法做,沒冰近8次,有冰7次方出頭
推 silverberry:用電的可以到 10^10 效果好~~
→ silverberry:如果真的要求這麼高 用買的會不會比較省事又有保障啊?
推 bluecsky:如果真要這麼高效率 我建議用買的= = 其實沒有很貴
→ bluecsky:10^8 10^9已經是滿高等的 要制作要很小心
→ bluecsky:除了含氧量以外 你養的轉速也要調整 讓他長好一點
推 icome:0.3-0.4就可以做了 不一定要到0.5
推 snowypuppy:我們家也是搖到OD值0.35就做囉～怕0.5的菌已經太老了