推 conan11:謝謝你 很棒的建議 我先用液態氮試試看 01/26 22:19
→ conan11:還想請問一下 vortex的強度大概多少？ 01/29 19:06
→ Asialin:最大強度 02/01 17:03
※ 引述《conan11 (民國的福爾摩斯)》之銘言：
: 最近用Promega的kit抽genomic DNA 覺得效果真的不太好
: 照protocal裡的處理只用了11mg的tissue sample
: 但是抽出來只有1~2ug的DNA
: 想請教各位是我有什地方遺漏了嗎？(Proteinase K也加了)
: 還是最好的辦法還是得用液態氮好好的研磨一下？
: 先謝謝各位的回覆
用液態氮磨碎是可以讓lysis時間縮短
但只要有充分lyse，不用液態氮也無所謂
我用QIAgen的kit，加tissue lysis buffer前用刀子剁碎
然後56度加熱，每十分鐘vortex十五秒
直到組織完全溶化變成均質溶液才進行下一步 (這很重要)
。。。。。。。。。。
QIAgen的說明書寫lysis time大約一到三小時，甚至O/N
實際操作大約是一小時左右
從你的文章敘述感覺似乎是lysis沒有做好
另外sample的量，不知是否你用的kit建議就是11mg
因為我沒用過P牌kit，Q牌建議是25mg，脾臟或淋巴結等細胞密度較高的組織則是10mg
你可以試試看用多一點組織
但不要超過說明書建議的範圍
不然lysis也會做得不好
個人經驗參考看看囉
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