→ vandia:推~ 經驗很重要,這我想破頭也想不出是這個原因... 02/08 22:48
※ 引述《pei24 (黑哥)》之銘言：
: ※ 引述《pei24 (黑哥)》之銘言：
: To 前輩們...
: 我把我切片染色的照片 po 在 http://www.wretch.cc/album/peipink
: 麻煩前輩們給予指教.....
: 我實驗室的perfusion protocol為以下
: saline 50 ml(流速約為 6 ml/min)
: 4% PFA 100-200 ml(流速約為 4 ml/min)
: 10% sucrose 50ml (流速約為 4 ml/min)
: 取出 spinal cord 之後會把 L4-L6 切斷
: 泡20% sucrose 待下沉後改泡 30% sucrose 約3天
: 用O.C.T包埋,放在-20度等O.C.T變白後再放在-80
: 至於切片時我的刀片每換一個組織我就換新的刀片
: 在切片的過程中也會不斷的換刀片的位置...
: 請給予指教!!
以前我待過的lab是做SMN的, 常要切spinal cord, 你的問題我遇過,
出現很多破洞.
切spinal cord, 做perfusion還是比不做perfusion切的效果更好，
雖然這個流程很花時間。
會出現破洞的原因是出在perfusion時的灌流速度過快所致，
由於灌流速過快, 造作微血管爆破, 而造成了切片上的空洞。
perfusion時將流速減慢, 你就可以得到很完美的片子了。
其實你已經切的不錯了。
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