[方法] 用enterokinase切protein的條件

[CCDMer (Best)]

各位板上高手

最近實驗遇到瓶頸,使用載體是pET系列, 想要把target protein前面

的一段thioredoxin用enterokinase(EK)切掉,但一直試不出EK的條件,

我的方法是把target protein用HIS tag方法純化出來後(有跑PAGE確定明顯有band)

加EK切 16'C 16hour後,跑PAGE完全沒band,室溫切16hour也是一樣沒band

真的找不到其他條件去切了,我找出幾個問題想問


1.實驗室的(SIGMA) enterokinase是固體,我用H2O去溶,這樣EK有活性嗎?

2.還是我直接破菌後不進行純化,破完菌切EK效果會比較好?

3.EK切完後還要再過一次colum純化,有什麼方法可以去掉potein中的EK?


感謝!!!






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◆ From: 140.127.215.32
→ kotenka:sigma提供的datasheet是說要溶在enterokinase buffer裡，
→ kotenka:如果是買enterokinase solution，datasheet提到是溶在
→ kotenka:Tris-HCl, NaCl, CaCl2和glycerol。
→ CCDMer:感謝~~k大建議容在哪種會比較好?
→ kotenka:我沒用過這東西阿；上面提到的chemicals是全部加在一起，
→ kotenka:你何不去sigma看看datasheet，濃度都寫得清清楚楚= =