[討論] 冷凍解凍會對DNA濃度改變?

[bee921 (BEE)]

小弟目前利用luciferase來檢測promoter的活性

同一個promoter做serial deletion所以有4~5種plasmid constructs

因為這實驗plasmid濃度很重要(統一我都下1ug)



在第一次時 用nanodrop測過濃度後開始我的實驗

(平常儲存DNA聽建議都放-20)

所以在進行第二次實驗將DNA解凍後 想沒事說來測個濃度看看(不到一個禮拜)

硬生生有幾管濃度就是偏高跟偏低(差了快100多ng) 讓我有點傻眼


想說會不會是因為冷凍解凍的關係 還是我第一次沒重複測很多次

所以我重新在測很多次  確定濃度改變不大 完成我的實驗
(共做了兩次 DNA改存放在4度C 等到確定不用時 我才凍回-20)




隔了兩個禮拜多 重新解凍

心裡不安的又去測了一下濃度...

這次又有兩管DNA濃度不一樣了 Orz  但是其他管還蠻接近的

差了也是一兩百ng (機器才剛校正過)



誰能告訴我是怎麼回事嗎.....Q_Q

還是說我只要使用前都測一下濃度 然後在來調整我下的量就好勒
(自己想說是不是每次應該都要一樣勒)

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◆ From: 140.112.84.225
→ hellheavn:我覺得1.準備時濃度預先提高 2.疑問是大大有先spin才測?
→ bee921:h大 我的濃度都500ng/ul以上 所以下的量都是不到3ul
→ bee921:我測之前有spin 不過倒是都放在冰上~不知道會不會影響
→ chaunen:是抽大量時 沒溶完全嗎?
→ hellheavn:我們家倒是有遇過大量抽失敗的經驗
→ hellheavn:應該不會影響太大 回蜜蜂大 DNA的量夠做即可!!
推 Fourfish:可能是blank的關係 你連blank一起冷凍解凍看看
→ bee921:抽大量是用kit抽 溶得很好阿!所以h大覺得差1~2百沒關係囉?
→ bee921:F大 我的blank是水(DNA用水elu) 不知道大家是不是用TE
→ bee921:因為抽完太低可以濃縮一下  所以我大多都用水
→ Fourfish:我的意思是 每次重取水做blank都會有些微差異
→ bee921:這我倒沒想過  可是差到100~200ng...(而且還有其他管是準)
→ Fourfish:如果你測DNA之前有稀釋的話 乘回稀釋倍數就會有明顯差異
→ Fourfish:這只是我的經驗啦 發現每次重取水做blank會有差
推 isdorothy:REPORT ASSAY有加renilla或beta-gal做internal control
→ isdorothy:所以其實還好不是嗎＠＠