[求救] 蛋白質誘導不出來!!!

[CCDMer (Best)]

各位板大好:

最近遇到了一個很頭痛的問題~又急著又無奈所以只能來這求救

我使用pET101接上的我的目標基因~用BL21(DE3)進行誘導

我的方式是pET101/BL21隔夜培養後, 隔天再取1CC加入到新的LB medium

誘導到OD=0.5~0.6 ,加入IPTG(1mM)後, 37C培養3~6小時~跑SDS-PAGE


降溫誘導,加入glucose這些條件,這個我都做過了,我的蛋白質約在14kDa


也不可能是包涵體的問題,因為我是連誘導都誘導不出來,試條件快兩個月了


是因為分子量小所以誘導不出來嗎? 換別株相同的pET101的clone也是無法誘導


,想說是不是pET101無法誘導小蛋白質~~我真的沒有辦法了~各位板大救救我好嗎?





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◆ From: 114.40.162.176
→ turtle24:序列正確嗎  還是說產量太少所以看起來像沒有
→ CCDMer:序列正確!!產量真的看起來像沒有!!因為誘導3~6H應該很明顯
→ biingru:請問你的plasmid放進 BL21(DE3) 是第幾代？
→ biingru:還是你從transformation成功的plate劃出來放進broth?
推 biingru:還是說你有分盤 取一個colony畫在別的盤子上
→ statan:換E.coli吧，BL21(DE3)對於真核蛋白的表現很差。
推 icome:codon usage的問題? 送human tRNA genes試試
→ CCDMer:biig大~我從第一次transformation成功後挑起來broth了~沒在
→ CCDMer:繼續繼代~轉進去BL21後就store起來了
推 chiehgriffin:try rosetta