[問題] <100bp的 sequencing

[sunearth (什麼都在漲)]

        最近老闆想說要sequencing一些小片段的 PCR product (60-80bp)

        PCR這些小片段sequence 經過幾次測試之後

        都跑得出來 電泳也確實看得到東西

        但是送去明欣定序後

        說片段太短沒辦法做 他們重定了幾次 都沒辦法讀到

        他們建議要>200bp 才有辦法定序

        不過老闆看的paper 上頭寫說 QPCR product 可以下去direct sequencing

        看起來就是可以讀得到的@@


        請問各位大大有啥方法可以讀出這麼小片段的sequence嗎？

        目前我是打算把這些PCR product接到plasmid裡面

        再讓他們從plasmid上整個下去讀sequence

        不過老闆真的很急很急 想問問各位大大有啥其他方法可以更快得到答案

        謝謝各位。


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.116.93.172
推 spirithorse:小片段很好接上,而且方便以後你要繼續ampify他
→ spirithorse:以後需要只要抽maxi,再切就好,不用在PCR了
推 dodomilk:TA cloning下去作吧 你PCR出來的東西也不一定純
→ dodomilk:早上PCR+ligation+塗盤 晚上挑菌 隔天早上作mini
推 enisx:PCR product(純化後)->ligation->Transformation塗plate
→ enisx:隔天長菌用同一組primer作coloy PCR-->定序
推 lulusa:20bp是primer 40bp是反應不良區 定序還沒開始就結束了...