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※ 引述《tunafung (無)》之銘言: : 我知道Cre-loxP的系統是怎麼作用 : 我想請問的是一般用這個系統的時候 : 是用什麼策略來交配小鼠 : 比如說我現在有個 vil-Cre/+ 的老鼠 : 跟ALDH2 Lp/Lp的老鼠配種後 接下來是要跟哪種基因型的小鼠在配 : 然後繁殖 感謝各位大大 通常我在看這個系統的時候 會注意的是 1.Cre是在什麼條件下會被表現? 2.loxP 包住的是什麼區域? 像你提到的vil-Cre似乎是會在大小腸、腎臟還有proxima tubule這些地方表現cre 於是在發育的過程中,只要有表現過villin的細胞,它的ALDH2都不會表現 所以會造成這隻老鼠的大小腸、腎臟還有proxima tubule等部分都不會有ALDH2 接下來就是要看你怎麼設計了,比如說你想要把所有Cre作用過的細胞都做標記, 那你可以把帶loxP-stop codon-loxP-eGFP 這樣repoter的老鼠在配依次 你就可以拿到cre作用後會有GFP信號的老鼠,可以很簡單的透過flow去分析/分離 (當然上面只是我在嘴砲,實際上還是要看看你的實驗需要) 而對於Cre的操縱也還有很多種更細微的調控法, 比如常常看到Cre-ER這種在Cre上面接了estrogen receptor的fusion protein, 於是就會造成需要給老鼠estrogen的時候才會開始有Cre的表現與作用 還有loxP包起來的區域也會有不同的效果,比如包了某個基因的exon,那這個基因 可能就會被KO。又或者如果是包了某個CDS前方的stop codon,那這樣子Cre作用後 反而會打開這個CDS的表現。 所以在看這個系統的時候真的是處處玄機有夠刺激啊.. 這只是我個人的觀點啦,有錯還請版上各位指正.. (尤其是柏油大神,他們家可是這方面的專家) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.34.151