Re: [求救] Cre-LoxP系統

[neuralandre (七彩喇叭手)]

※ 引述《tunafung (無)》之銘言：
: 我知道Cre-loxP的系統是怎麼作用
: 我想請問的是一般用這個系統的時候
: 是用什麼策略來交配小鼠
: 比如說我現在有個 vil-Cre/+ 的老鼠
: 跟ALDH2 Lp/Lp的老鼠配種後  接下來是要跟哪種基因型的小鼠在配
: 然後繁殖  感謝各位大大


這種是conditional KO  就是只有在特定組織或器官被剔除的KO mice

妳現在有兩隻老鼠  一隻是vil-Cre  另一隻是ALDH2
這樣配出來的老鼠就是表達vil的organ or tissue  ALDH2會被KO

你的問題應該要這樣問  你原始的ALDH2老鼠  是兩條allele都有loxP site
還是只有一條?
如果是兩條都有的  跟Cre老鼠配生的就是-/-(在特定組織)  一條的就是+/-
拿到老鼠就可以做實驗啦

你原始的ALDH2 conditional KO mice
可能需要根據實驗需求來做backcross breeding  這才是比較麻煩的地方

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 221.169.50.122
推 pent:沒做過有點好奇，back-cross麻煩是指？原本的老鼠難找？
推 tunafung:感謝neu大  我的ALDH老鼠是兩條都是Lp/Lp
→ tunafung:我想知道backcross breeding的一些細節  麻煩neu大了
對不起  我這邊寫錯了一些地方
其實應該是這樣
你拿  vil-Cre老鼠去配ALDH2  Lp/Lp老鼠  下一代拿到的一定是 ALDH2 +/-的老鼠
因為一條Allele一定來自於vil-cre老鼠   它沒有loxP site  所以ALDH2還會在
另一條來自ALDH2-/-老鼠   才會被delete掉
所以你要再用+/-老鼠再配一次  才會拿到-/-的老鼠
這邊是我昨天想的時候的失誤  抱歉了

至於backcross  breeding   跟genetic background有關
就是你拿到ALDH2 conditional KO老鼠的時候  是從chimera下來第幾代
有些chimera是用129sv strain的ES cell打到B6 strain的embryo做出的

這時候有些journal會要求你要用backcross到B6 strain的老鼠第n代
實驗做出的data才會被接受 (n=10 or其他)
當然你一開始用B6的ES cell打到B6的embryo就沒有這個問題
或者你的老鼠拿到的時候已經backcross夠多代了  那也沒問題

不止journal要求  在國內外KO的討論區內  有些PI發現  某些gene的KO
在pure的genetic background才有明顯的phenotype
※ 編輯: neuralandre     來自: 221.169.50.122       (06/27 20:39)