作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
時間Tue Aug 10 03:45:04 2010
我想要用的那個 vector 序列上確定有酵素切位
但是沒錯 我現在就是在懷疑：
手上這管不是我抽的 midiprep 到底是不是標籤上寫的那個東西 以及品質如何
gel 上看起來大小是對 而且也很純
可是我們 lab 本來就有好幾支相關的衍生 vector
另外也不知道 buffer 裡面有沒有什麼怪東西... 酒精沒去除乾淨？
（酒精太多影響酵素作用 好像有道理）
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TA construce 雙切以後看起來還滿乾淨的 就被切的 vector 以及我要的 fragment
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打算作的幾件事：
1. double digest overnight 再試一次
2. 同時作 vector only with/without ligase 的 transform
至少可以確定是沒切到還是只切一刀
3. 同時拿手上這管 pCS2+ 直接 transform, 重抽 midi,
順便送 seqencing 看看 MCS 對不對
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◆ From: 131.212.202.90
→ match308:你不分別做single digestion嗎 只切一刀能解釋為什麼V+I 08/10 07:25
→ match308:長比較少,因為只有一邊黏起來,另一邊黏不起來,所以有 08/10 07:26
→ match308:vector and insert ligation的反而沒辦法form colony 08/10 07:27
→ match308:做2.如果vector已經去P了,就算只切一刀跟切兩刀會差不多 08/10 07:33
→ boblu:分別作 single digest 以後跑膠有作過 看起來都正常 08/10 09:40
→ boblu:但是我現在想到我作 single digest 的時候, DNA 稀釋較多倍 08/10 09:40
→ boblu:可能因此減少了酒精什麼的雜質的干擾`? 08/10 09:41
→ boblu:至於 single digest 以後的 transform... 應該是沒有必要吧? 08/10 09:41
→ match308:沒甚麼必要,那就等2的結果吧 08/10 11:16
→ match308:我覺得有沒有酒精不是重點 08/10 11:17