Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …

[boblu (六百)]

我現在不是作 TA 是要接到 double digested 的 vector 裡面啊

kit 建議的用量是 vector 50ng, insert 三倍分子數啦

切 3ug, 回收 2.2ug, 回溶 40uL 剛剛好濃度啊

RE 一種放 1uL (10U) 理論上只作用一小時不是都超量超很大了嗎？

不過看板上大家都建議放更多？ 下次試試看好了

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 71.10.75.57
→ match308:我都放超量切overnight,如果你要切的兩個site很近的話
→ match308:enzymes互相干擾會比較難切~
→ gryou:我都切3μg Vector 用 4μl(20U/μl)去切再用CIP 作用
→ gryou:切個6小時  挑20個都得到我要的 你可以試試看 enzyme 多一點
推 afunafun:你酵素反應體積多少 太少會切不好 少說體積要50ul
→ afunafun:酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10
→ afunafun:酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10
推 aceliang:我想體積應該是不用那麼多啦...測試起來20ul算是不錯的。
→ yaliu:我比較建議50ul，如果要純化作後續實驗...20我覺得太少耶
→ boblu:我作gel extraction 的 kit 最小 elute 體積是 30uL