[求救] 請問RT 之後測量cDNA 之量準嗎?

[mzac1b (Goodday)]

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出

以方便板友幫您追蹤問題

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我進行一批樣品的RT-PCR 時
會先測量RNA 之量
再取定量RNA 去跑RT

可是RT之後
去跑GAPDH 之PCR 時
常常顯示各樣品cDNA 量並不一致
於是要調整老半天以求各樣品GAPDH 之PCR 產物一樣亮

想請問的是
如果跑完RT所得之cDNA 之溶液
以photometer (測定特定吸光值) 去測單股DNA 之量來判斷cDNA 之量準嗎?
或是有沒有辦法在跑PCR 之前先確認各樣品cDNA之量一致?

先感謝指教~~





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◆ From: 210.60.122.14
推 leoblack:RT-PCR不就只能當"相對"定量嘛!?得做均一化才行啊
推 wangba:有做cDNA沉澱 把RNA和dNTP去除嗎?  沒有的話測不準
推 icome:老問題囉 cDNA吸光測不準因為裡面有很多dNTP
→ iceking:只能在RNA定量及RT過程盡量改善手法,減少後續調整麻煩
推 chaunen:只能盡量減少pipette error...
推 chicflower:訄搯ㄓFpipette error之外,還有哪些要注意的呢?
→ chicflower:我每次都很小心,可是每次轉出來GAPDH多少都會差一點> <
→ chaunen:除了RNA外, 其他東西都配成一管再分裝, 確保差異最小