推 justpao:學長讚啦!!!!XD 09/30 20:02
※ 引述《owl628 (owl628)》之銘言：
: 大家好~最近要報告一篇paper
: 但是之前沒有接觸過細胞跟動物實驗(之前做酵母菌)
: 因此有一些應該是很基本的地方有點不太清楚
: 也沒什人可以問
: 我也有努力去查很多資料,但因為真的沒碰過,所以還是不太清楚
: 拜託有人可以幫幫我,稍微解釋一下
: 首先他選用HEK293細胞利用RNAi的方式降低A基因的表現
: 接著作者希望在老鼠上利用cre-loxP的方式KO A基因
: 但是所有的胚胎都死亡
: 之後發現在老鼠的肝臟可以專一性的KO A基因
: 接著作者又利用A基因KO的mouse embryonic fibroblasts(MEFs)
: 它是利用表現CRE的病毒去感染MEFs達到剔除A基因的目的
: 首先我想問的是
: 1.為什麼要再利用MEFs去做HEK293已做過的實驗,因為它是primary cell嗎???
: 結果會比較可信???那為什麼不要一開始就用MEFs做,因為比較麻煩嗎???
建議您可以將paper附上
因為缺少實驗目的，版上大部分的版友很難給您適合的答案
: 2.為什麼HEK293不用cre-loxP方式剔除,而MEFs為什麼不能用RNAi的方式???
建議您先查一下Cre-loxP的原理，再想想HEK-293會有loxP的序列嗎?
MEFs的問題也建議先附上實驗目的，以免對您造成誤導
: 3.還有為什麼A基因剔除的老鼠胚胎會死亡,而經病毒感染的A基因KO的MEFs卻可以活,
: 是不是兩者根本沒啥關係,MEFs只是一種常用的primary cell而已???
通常Conventional KO的老鼠 (全身每個細胞的A基因都遭到剔除) 出現胚胎死亡時
原因相當多種，因此，「胚胎死亡」與「MEFs死亡」不見得會有一定的關係！
: 4.最後都有肝臟KO的小鼠,為何還要用MEFs重複實驗,老鼠的實驗結果應該比
: 上面問題對於有經驗的人可能都是很基本的問題,
: 但是我真的不是很了解實驗上一些選用的細節
: 麻煩知道的人幫幫我,跟我說一下,也請你多多包含我問了很多蠢問題
: 真的拜託知道的人救救我,非常感激~~~~~~~~~
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我不想在球場上當一個沒用的人
也許我真得不是很厲害
再練下去也只有這樣子...
可是.......我就是會認真地去練習
賭賭看明天會不會變強一點...
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