Re: [求救] 細胞污染

[miwy (孤獨何緣)]

※ 引述《miwy (孤獨何緣)》之銘言：
: 1.
: 這幾個禮拜都在挑stable clone
: transfection後細胞跟medium裡都會出現黑黑的顆粒
: 黑色顆粒會黏附在細胞上 然後有些會飄在medium中
: 而且通常是很大一坨
: 但細胞不太會死
: 只送空的vector進去又不會出現
: 是單純送進去的gene表現造成的結果嗎?

因之前細胞真的被細菌污染了= =整個臭掉 所以又重做一批
然後想說DNA是不是有點問題
所以過了一次filter
只是這次更傻眼
再配mix的時候就出狀況了= =
我的步驟:
補水 +plasmid +CaCl2 +BBS
照上面的順序加 結果加完BBS整管看的到裡面有白白的混濁物
然後測試過水+CaCl2+BBS
水+CaCl2(不同批的)+BBS 都沒出問題
然後上面測試用的一加我的plasmid 就又濁掉了

因為有一管我沒注意到所以就先加到細胞裡了
結果在顯微鏡下觀察 就出現之前的狀況 會有一堆顆粒黏附在細胞上
所以我想可以確定不會是細胞或DAN表現的問題
但是會這樣子應該是我的溶DNA的溶液有問題吧
我應該用酒精沉澱嗎?還是說重抽一批???
因為之前要等到加入後的一天才會有顆粒出現 可是這是卻是在混合的時候就出現了?
所以也想請問為什麼會有這樣的狀況出現?
從上次到現在這次中間只過一次filter plasmid沒有做過其他處理
感謝T口T

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            ξ                     我獨自欣賞孤獨
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◆ From: 140.112.130.159
※ 編輯: miwy            來自: 140.112.130.159      (10/07 09:07)
※ 編輯: miwy            來自: 140.112.130.159      (10/07 09:33)
推 aceliang:你用CaCl2 precipitation transfection本來就會有顆粒阿
→ aceliang:細胞還會看起來扁扁的咧。
→ miwy:可是顆粒多到聚集成一堆一堆的應該就不正常了吧?
推 aceliang:你混和reagent的時候有vortex或是bubbling嘛？
→ chaunen:不管有沒有votex or bubbling, mix後直接加進去
→ chaunen:噢 會錯意了 歹勢. 我用水溶DNA OK
→ miwy:沒有vo或bubble...之前都沒這樣做也都還ok
→ miwy:只有這次才出現顆粒聚集的狀況打算重抽一次midi了...