→ blence:看錯表了,應該看one end,不是two end,而且原po是看BamHI 11/03 16:05
※ 引述《keepseaching (絕心忘情)》之銘言：
: 我在進行的實驗是將一段A基因約1kb
: 接入pCambia2301這個vector約13kb
: 所用的cutting site為BamHⅠ與XbaⅠ
: 所用的條件如下
: Insert 10μl
: Vector 4μl
: bufferA 2μl
: bufferB 2μl
: Ligase 2μl 4℃反應overnight
: 做了數次卻接不起來
: 基本上我的A基因與vector都check過了
: 所以我在猜想
: 是否是因為我選用的這兩個cutting site相鄰
: 導致用酵素切的時候沒辦法兩端都切
: 不知版上有經驗的版友
: 有沒有遇過類似的問題
可以參考這網站（不好意思 懶的縮網址）
http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/
cleavage_olignucleotides.asp
理論上xbaI酵素尾端只多１個nucleotide效率很差！根據這個表的結果效率～０
建議你先切XbaI再切EcoRI，EcoRI沒這個問題
另外XbaI很容易受到甲基化的影響
http://www.neb.uk.com/productcatalogue/productinfotransfer.aspx?id=faq-R0145
若是他附近的site被甲基化就沒辦法切
（這個vector上面應該會標是他是否有被甲基化，若有就要用不會甲基化的菌來作）
--
單身不代表寂寞，寂寞是走在一個不愛妳的人身邊的時候。
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.121
※ 編輯: aggaci 來自: 140.116.253.121 (11/03 14:01)