最近在做 cytochrome P450 的酵素實驗
之前我提供能量的方法是直接給予 NADPH
但是有很多文獻都是給予 NADPH generation system
(NADP+ G-6-P G-6-P dehydrogenase)
現在問題就是，我利用NADPH為能量作酵素活性測定沒有反應
而老師希望我改用 這個 system 試看看，可是我又怕並不是這裡的問題
我把我的實驗流程寫一下
1. 萃取 microsomal fraction (利用超高速離心取沉澱，利用buffer沖散)
2. 90 ul protein(1mg/ml ~ 3mg/ml) + 100 ul 含 2 mM p-nitroanisole (受質)的buffer
3. 加入 10 ul 10 mM NADPH 後放到 30度 的環境下 反應 30分鐘
4. 測吸光植
不知道有這方面經驗的學長，能否給予一些意見
因為酵素似乎都沒跟受質反應....
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