Re: [求救] ligation 的正接反接

[ganbaol (ganbaol)]

以前聽老師說過


不管你用 heatshock 或者是 Electroporation


將接好的 plasmid 送進細菌


都有機會送入多個 plasmid (如同你說的有正反接情況)


但是隨著代數的增加


複製到最後


只會剩下一 "種" 喔 Q Q


至於為什麼就不知道了


但可以知道的是,


挑單一的 colony 就只會有同一 "種" plamid


但多個 copy number的情況出現這樣...





※ 引述《rickkao11 (rickkao11)》之銘言：
: 請問一下大家ligation 的問題
: 我的insert用EcoR1切一刀，vector也是一樣處理
: 在ligation時,有可能出現正接會反接的情況
: 後來進行transformation，是不是會出現同一個E.coli中同時有正接和反接的plasmid ?
: 請問大家要如何處理這個問題

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.79.149
推 icome:質體不相容 具同樣Ori的plasmid只會留下一個
推 rickkao11:謝謝您的回答
→ chvkimo:老實說, 我又想問質體不相容的原因是啥?
→ williamyang:google一下plasmid incompatibility就可以了
推 chvkimo:恩 有看到了  謝謝樓上
→ a90648:應該不一定剩一個，跟plasmid可容許的copy number也有關吧
→ a90648:回錯方向..... = =  只會剩一種沒錯
推 bluep:會剩一種，但不是剩一個
推 yaliu:1樓正解~
→ icome:對 是剩一"種" = = sorry用字不當
※ 編輯: ganbaol         來自: 120.126.57.51        (03/24 18:16)
→ ganbaol:用種比較合理沒錯 XD  感謝大大的補充~
推 rickkao11:後來想一想，但都是同一種VECTOR，細菌區分的出來insert
→ rickkao11:正接反接的差異嗎？長度都一樣啊
→ david6602ok:對細菌它需要是抗生素Re, 正/反接對它生長影響不大吧?
→ david6602ok:如果是人要看就設計primer定序便知道啦
→ david6602ok:把定序結果去NCBI BLAST align一下
推 david6602ok:看是Plus還是minus
→ e5f6:答案請看GENE IV  我懶的查了 反正就是會有排斥現象