Re: [方法] 關於ligation

[soom ()]

※ 引述《boblu (六百)》之銘言：
: 要搞懂還是弄一套 molecular cloning 來看看比較好
推這本是cloning聖經，有問題先看一下通常就會有解答
: ※ 引述《Johnpolo (隱行)》之銘言：
: : 想請問一下 我現在抽完RNA 然後是不是要轉cDNA才能ligation
: : 那是要用什麼方法 是用一般PCR 還是RT-PCR
（以下恕刪）

RT-PCR一般指的是reverse transcriptase PCR
real-time PCR的簡寫則是qPCR  RT-qPCR qrt-PCR或是 kinetic PCR
兩者很容易混淆

一般要從RNA做cloning的確是要先轉成cDNA再做PCR以產生大量雙股DNA

接著看是要直接用限制酶切還是先用TA cloning都可以

個人比較建議先做TA cloning，因為可以先定序，

之後也可以不用每次都還要做PCR，又要擔心產物會不會有變異

然後真的有不用ligation的cloning法

1. in vivo cloning
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC310636/
直接把線狀的PCR產物跟載體一起送進特定的大腸桿菌株
它自己會用homologous recombination幫你做

2. ligation independent clongng (LIC)
http://bitesizebio.com/2008/02/18/ligation-independent-cloning-primer-design/
這是用特殊的primer設計，讓載體跟PCR產物能形成可互補的序列

除了這兩個好像還有很多種設計就是了

但我想J板友應該要去跟實驗室的學長姊討論以確定實驗設計

不會就當場問到會，覺得奇怪就立刻問到了解

畢竟板友不是你們實驗室的，無法幫忙隔空抓藥

祝 實驗順利

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