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作者ganbaol (StarRain)
看板Biotech
標題[討論] 關於 knockdown cell line
時間Wed May 4 00:18:27 2011
重複感染了兩次 使用中研院 RNAi core 那套系統 跑 western blot check 過沒問題 normal 和 scramble 都有訊號 (還蠻強的) knockdown cell line (三株) 則完全偵測不到 但之後有一陣子(約一個月)沒做 所以先把細胞凍起來備用 現在把細胞解凍後已經有一段時間了 不管怎麼跑 western knockdown cell(三株)和正常的訊號都一樣強...囧 是integrate進去的片段被踢掉嗎? 不知道有沒有人跟我一樣發生過這種問題...... 是否只有重新感染才能解決? 請高人指點~ 感激 >"< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.42.200.106
推 kaifish:是否有經過puromycin篩選? 05/04 00:34
→ kaifish:如果你的基因與細胞分裂速度或死亡有關 05/04 00:34
→ ganbaol:篩過了@ @ 05/04 00:36
推 kaifish:可能knockdown後的細胞變成相對弱勢 05/04 00:37
→ kaifish:重複感染或是挑clone的方法對您也許有幫助 05/04 00:37
→ ganbaol:喔喔Q Q 謝謝樓上的建議~ 05/04 00:39
推 lovenainai:我看來最有可能的是 vector 被 methylated 05/04 09:56
→ lovenainai:你用的是那種 vector? 05/04 09:57
推 icome:puromycin有持續加嗎... 如果是KD oncogene不加很快就沒了 05/04 10:14
→ ganbaol:vector 是 CMV + MDG + RNAi 05/04 18:57
→ ganbaol:因為要做毒性測試 所以沒辦法一直加puro耶 Q Q 05/04 18:58
推 kakaman:會掉 趕快做完就好 05/10 22:24