[求救] 關於 SDS-PAGE 的問題

[jeffsu (歐巴馬)]

由於最近跑western 都跑不好看，但重配所有的成分仍無法改善

因此想徵詢看看板友的意見

以下我們實驗室的SDS-PAGE成分

下膠                     10%         12.5%  (不同%結果仍相同)
ddH2O                   4.2ml        3.2ml
30% Acrylamide-0.8%.... 4.1ml        5.1ml
1.5M Tris-Hcl pH8.8     3.0ml          ''
APS(0.1g/10ml)          0.6ml          ''
10% SDS                 120ul          ''
TEMED                   10ul           ''

上膠
ddH2O                   2.7ml
30% Acrylamide-1.2%.... 0.7ml
0.5M Tris-Hcl pH6.8     1.3ml
APS(0.1g/10ml)          250ul
10% SDS                 50ul
TEMED                   10ul

上膠 100V     下膠140V   (全程100V 仍無法改善)

跑出來的band 大概都是^^^^^^^^的型狀 (有點類似倒V，但沒那麼彎)

大概跑道下膠後由Dye就能看到這情況，跑完再transfer後用Ponceau S

確認過是跑膠就有的問題，因為以前用相同條件跑都沒問題，但最近怎麼跑

都是一樣的情況，我們實驗室也有跑zymography，也發生相同的問題。

想問看看是甚麼問題造成的，或是那個原始成分壞掉可能出現這種情況

希望有版友能幫忙，感謝~~

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◆ From: 140.128.138.38
※ 編輯: jeffsu          來自: 140.128.138.38       (05/23 16:59)
推 skenzo:我是用上膠 80v 下膠100v
→ jeffsu:以前用相同伏特跑起來並無問題，可能跟伏特無關
推 leoblack:buf pH值有無跑掉?!APS配完分裝冰-20,用的才放4度C
→ leoblack:以前的經驗是這3個sl'n出問題~
推 dodomilk:我也覺得可能buffer的pH值有問題，檢查看看吧！
推 impervious:確認看看SDS有無變質，之前實驗室有發生過類似狀況
→ impervious:10 percent APS 我都是新配的
→ cloneting:protein或鹽濃度太高 降低濃度或透析試試看
→ jeffsu:感謝imper大 換新的SDS後已經獲得解決
→ impervious:能幫上忙真開心 :)