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如果格式有問題的請不吝指教

今天抽RNA時(用REZOL)因為我的細胞量少，大約只有8*10^5，所以REZOL加了大約100ul

接著加入約20ul的chloroform靜置後離心取上清液

接著加isopropanol靜置半小時以上，THEN 離心去上清液

在所有sample中某一管的純度A260/A280只有1.53左右，其他大約都在1.7附近

現在不知道RNA純度1.5左右可不可以繼續做RT

請各位不吝提供經驗指教，謝謝~





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◆ From: 111.250.13.90
※ 編輯: starjim         來自: 111.250.13.90        (06/05 22:35)
→ shenhsu:我們實驗室是以跑膠看到shape band為能夠繼續做RT的標準
→ shenhsu:RNA純度應該是>2.0 所以你的sample可能有DNA或protein殘留
→ shenhsu:不過如果之前1.7左右都OK 那只要RNA quality好應該就OK
推 kakaman:還是可以做
推 vancent:一搬rtpcr其實沒差
→ starjim:想請問純度會影響到後面轉cDNA和PCR後的跑膠嗎?
→ starjim:那純度是會影響後續哪個部分?
推 kakaman:你可以試試看阿 我以前1.5左右還是照用...
→ sackler:usehot acid phenol extraction again
推 birdddd:1.7以下我就不用了耶 可能有雜質
→ starjim:那請問我如果做再次純化的話會比較好嗎?
→ FUJI0904:其實我覺得用這種抽法的話，因為細胞量少而減少REzol的
→ FUJI0904:使用量並不會比較好抽，因為如果你用的是一般的1.5 ml
→ FUJI0904:微量離心管，最後上清液會非常「薄」，很容易取到中間介
→ FUJI0904:面層，就會容易吸到DNA或protein。
→ FUJI0904:我建議如果下次還要做，還是用1 ml的REzol + 200 ul的
→ FUJI0904:氯仿，畢竟至少200 ul的上清液其實相對較好吸取
→ FUJI0904:而且比較可以不怕吸到中間層，不用擔心細胞太少的問題
→ FUJI0904:RNA的濃度決定在你最後的回溶，而不是一開始REzol加的量
→ starjim:我有加過比較多量的REZOL~可是離完心後上清液變的不透明
→ starjim:會有點粉紅色的REZOL的顏色
→ FUJI0904:要不要試著離久一點，我抽100萬顆還是用1c.c.也沒啥問題