[求救] 跪求E.coli strain: BL21-codon plus(DE3)-RP

[mournermind (阿矇)]

我是交大的學生

最近在表現一個分子量100KD多的蛋白

我選用pET30b做vector 表現量卻不高 (IN Novablue(DE3) & BL21 (DE3))

由於表現的基因GC％很高 因此懷疑可能因此造成表現量較低


希望版上哪位先進有

E.coli strain: BL21-codon plus(DE3)-RP

或是

E.coli strain: BL21-codon plus(DE3)-RIPL


或是

Rosetta 系列的菌（目的是想補充稀有密碼子,目前最想要這隻...）都可以

的菌株....可以向您要...我可以買飲料或是中晚餐交換QQ

如果再比較遠的地方我可以付郵寄費用....謝謝,....

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.173.247
推 aggaci:我有我在台南...既然妳在新竹我知道清大有誰有..
→ mournermind:Rosetta系列的菌也可以...目的是想補充稀有密碼子....
→ mournermind:樓上版大能寄信跟我說嗎QQ謝謝！
※ 編輯: mournermind     來自: 140.113.173.247      (08/15 01:16)
※ 編輯: mournermind     來自: 140.113.173.247      (08/15 01:24)
推 silverberry:分子量很大，真的確定是 rare codon 的關係嗎?
→ silverberry:http://gcua.schoedl.de/ 先 check 看看吧~
→ silverberry:如果真的有缺密碼子再看要哪個 strain
→ silverberry:我自己用過 rosetta 和 origami 那些系列。
→ silverberry:因為菌裡做了很多 modify, 反而用起來比酵母菌難用。
推 silverberry:ArcticExpress系列做inclusion body還蠻不錯的。
推 icome:應該是太大了 之前實驗室有人做過 800aa就幾乎做不出來
→ icome:大部分E.coli蛋白只有200-300aa 太長它會罷工XD
→ mournermind:因為我用rare codon calculater比對過 似乎rare codon
→ mournermind:有點多...
→ mournermind:謝謝大家的意見!我在跟老師討論看看!
→ mournermind:謝謝icome 不過我不敢隨意捷短因為這是要做抗體的
→ mournermind:蛋白...我怕到時候表現出來的不是native蛋白展露在外
→ mournermind:的就糟糕了...而且沒有結構可以比對QQ所以沒法猜...