[求救] 請問冷東切片螢光染色結果與WB不符合

[mikis1107 (mikis1107)]

我是做心臟autophagy現像
取病人組織做免疫螢光染色與WB來判別

1.WB結果A病人的LC3Bb II表現量高  B病人的則沒有
  推測A病人的心臟autophagy比較明顯

  但是在冷凍切片的結果卻完全不同

  A病人的心臟切片Myolysis現像很少
  細胞染F-actin的狀況下, 細胞有空洞的很少
  B病人的心臟切片卻有許多空泡產生

Q1: 是否應該將組織換各個不同的面切切看?
    說不定正面細胞較健康但另一面的細胞卻有很明顯自嗜作用??



2. 染LC3B的切片結果也很怪
   幾乎整個細胞都有染到LC3B,根本也看不出來哪一個病人表現量高
   我是1:400 dilute在過濾的PBS裡面
   螢光顯微鏡下本來希望A病人可以看到LC3B II 的particle的產生
   但是現在根本看不出趨勢

Q2: 是否應該降低稀釋倍率, 再以confocal來觀察??

由於組織上面有很多黃色的小點干擾
所以對於particle的判定也會有影響
推測應該是RBC但是因為是開刀房學姐幫忙包埋
在第一時間也無法得知他們是否有將組織清洗乾淨
Q3: 是否應該在取回組織的同時再自行清洗後重新包埋一次??

搞了好久都做不出好看的data
真的很洩氣T____T

謝謝各位了~~@@

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◆ From: 223.141.119.146
→ sancra:LC3B II只是中間形成autophagosome的一個過渡狀態
→ sancra:所以應該不能拿wb的結果跟單純HE切片結果比較
→ sancra:另外LC3B II本來整個細胞都會有的，只是有autophagy會形成
→ sancra:particle而不是散佈在整個細胞
→ sancra:所以要做IHC是否換個不同的marker去染會比較好呢?像Atg