[求救] real-time PCR 試劑問題

[cmublue (BLUE)]

小弟實驗室的real-time PCR機器是用ABI step one plus

之前是使用Roch的reagnt

最近剛換了一家新廠牌的SYBR green reagent

(KAPA SYBR FAST qPCR kit, Master Mix 2X ABI Prism)

發現在melt curve中會出現 double peak

起初以為是primer 汙染 , 但是在做檢測時發現(primer重泡)

就算是negative control (只load 水)

不只有melt curve 還會有一般的螢光訊號 (28-30的cycle附近)

要說這是汙染 為免汙的量也太大了吧

目前是還沒去將p出來的產物拿去跑膠

想請問各位先進, 除了primer汙染之外,還有什麼其他的因素會有可能造成這個現象




ps我記得業務有說過他們家的這個reagent SYBR green下很重 ,所以訊號都會很強
   但跟我這個結果有關係嗎= =





以上                           感謝各位幫忙解惑 ^ ^/

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◆ From: 140.128.67.246
推 Rarelay:我只加 template or 只加 primer set 都沒有訊號
→ Rarelay:忘了說我是用 KAPA Universal Reagent
→ nexusfantasy:你的 negative control 是指沒有 template 嗎？
→ nexusfantasy:還是全部都是水 給機器去讀？
→ nexusfantasy:要先排除掉是primer dimer的可能性 才考慮background
→ nexusfantasy:KAPA我之前用在bio-rad的機器 效果還ok 沒什麼問題
→ cmublue:N大,yes只load水和primer with reagent (no template)
→ nexusfantasy:你的internal control是否也有兩個波峰？
→ nexusfantasy:若沒有 可能是target gene引子設計或黏合溫度的問題
→ TauriCrab:就污染 不用太相信廠商