[求救] MDCK 培養

[nprotei (NEil)]

想請問，各位有養 MDCK 經驗的朋友

如果要把長滿的細胞「全部」收起來數

trypsin的量，和反應時間(加medium recover之前) 大概怎麼估


我們之前實驗室 routine 在做

75T 是加 4mL 讓它反應 30mins，後加 6mL medium 之後數

(很抱歉 trypsin 濃度我我沒有很確定)

當然我們的定不是標準做法。



現在因為實驗需要，要在 25T 和 6 well plate 中養MDCK並計數

請問這樣 trypsin 和反應時間要怎麼修正最好


謝謝！

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.211.12
推 a900535:我只有切過10 cm的，不知道能否幫上你的忙
→ a900535:如果是10 cm以1:2分盤隔天會滿的比例，我trypsin下2ml
→ a900535:10min左右就能全切下來，保險一點大約15min
→ a900535:1:4後天滿的比例，切的時間延長到15，20min會全切下來
→ a900535:1:6則要30min，通常無法完全切下來...
→ a900535:TE濃度是10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在10ml 1X PBS中
→ a900535:計數一樣是取6ml打勻後，取10ul和mem,trypon blue做稀釋
→ a900535:我通常是做四到八倍稀釋，沒有做過（全部計數）
推 tinaminikimo:10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在9ml 1X PBS中 15min
推 artless9999:請問一下RNA Later如何使用於肝組織?使用效果如何?