推 HEK293:要馬EDTA+heat inactivate，不然就先跑膠，晚一點elute 10/07 13:04
→ ennnnno:請問是膠的話就直接放在enpendoff裡加水保存就可以放久 10/07 13:14
→ ennnnno:一點了嗎謝謝 10/07 13:14
→ nike77114:過clean up然後保留在TE buffer比較穩吧(喔當然一定要65 10/07 13:33
→ nike77114:度C 讓酵素失活喔!!) 10/07 13:33
→ nike77114:應該說在你CIP處理完後就應該要讓酵素失活了@@ 10/07 13:34
→ ennnnno:有喔,已失活了,只是在想需要跑很久的長膠嗎?學長說要六小 10/07 14:31
→ ennnnno:時! 10/07 14:32
→ nike77114:不太了解為什麼要跑長膠耶?為了要check什麼? 10/07 16:16
→ nike77114:這方面我就不太熟了 10/07 16:16
→ yaliu:可能要讓你跑遠一點，比較不會切到未切部份吧 10/07 16:18
→ yaliu:elution的時候......。CIP完不處理也還好，切完再elution也 10/07 16:19
→ nike77114:樓上大大可以解釋一下嗎@@? 10/07 16:19
→ yaliu:可以～～他是DNA還蠻穩定的，冰冰箱就好了 10/07 16:19
→ nike77114:跑遠一點是? 10/07 16:19
→ yaliu:就是你現在只切一刀，基本上片段很大，怕circular跟linear 10/07 16:21
→ yaliu:很近～～切膠可能會切到未被作用的質體，我猜的拉～～ 10/07 16:21
→ yaliu:不過長膠的意思是什麼我還真是不了解就是了... 10/07 16:22
→ ennnnno:因為其實切一刀感覺要從膠上看出來有無差異性我覺得很難>< 10/07 16:24
→ ennnnno:所以我就偷懶的只跑了短膠,然後elute.... 10/07 16:24
推 yaliu:跑遠一點會比較保險拉～就跑一個未切一個有切，這樣比較好看 10/07 16:26
推 bluecsky:要分circular跟linear其實跟跑的速度比較有關.. 10/07 17:18
→ bluecsky:你電壓都開80 100v去跑 跑長膠也還是黏在一起 10/07 17:19
→ bluecsky: 不過正確說法是 v/cm這比例 膠夠長 同電壓這比例就會降 10/07 17:19
→ bluecsky:好吧 其實定電壓下 跑長膠好像也是對的 (錯亂了 抱歉) 10/07 17:20
推 mattmatt:另外以現代的EcoRI效率 切o/n之後應該不會再有沒切開的吧 10/08 01:32
→ mattmatt:我也想知道跑6hr長膠的目的是甚麼 10/08 01:33
→ nike77114:據我之前問老闆的說法是，這個方法以前人蠻常用的 10/11 00:18
→ nike77114:似乎是可以分circular跟linear form的vector 10/11 00:18