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不用 urea 的理由其實有點奇怪 你確定你不 denature, 這蛋白質就是有效的嗎? --- 真的死也不想 denature 的話, 那把 his-tag 換個位置看看吧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 97.92.0.104
TOTO:他用native的理由很合理啊,你不知道refolding後的結構仍一樣 10/07 21:10
boblu:我的意思是 E.coli 表現出來的你本來就不知道是不是native 10/07 22:57
diffa2:雖然用E.coli表現出來的protein不確定是native,但在經過 10/08 02:26
diffa2:denature後renature程序是否會增加protein folding的不正確 10/08 02:31
diffa2:性?才想避免這個過程 10/08 02:32
我的意思是 現在反正也不知道你生產出來的東西 folding 到底對不對 然後又純化不出來 那何不試試看 denature 即便之後 refolding 不成功 嘗試純化 denatured protein 的過程也會得到很多有助於 troubleshooting 的資訊 成本又多不了多少 就多養一批菌 多用一個透析袋而已 而且又不是同時只能做一個實驗 試著純化 denatured protein 的同時 還可以 1. 調整養菌的條件 2. (評估是否需要)重做 construct, 把 his tag 接到另一頭 ※ 編輯: boblu 來自: 97.92.0.104 (10/08 22:03)