[方法] 關於用lentivirus感染primary neuron

[aggaci (台南工作的基隆人)]

  大家 不好意思

  我想請教各為一個關於lentivirus感染neuron的問題

  我用lentivirus去感染neuron效率一直都不好
  我的作法是收10盤10公分dish的293FT的上清液(共200 ml)
  過.45 filter之後超高速離心純化病毒以200 ul的PBS+1% BSA回溶

  這時病毒濃度極高，光5 ul就可以讓一盤10cm的SH-SY5Y全部表現GFP (效率應該有9成)
  但這時我將這病毒濃縮液加100到一個6公分 dish的neuron(貼盤後3天的神經細胞)
  表現GFP的neuron約1成不到....(對不起 我沒測titer XD)
  astrocyte占全部細胞其實不多(約5%以下)，
  但不知為何  感染成功的幾乎都是astrocyte.........= =

  我有去問有達到號稱有95%感染效率的實驗室
  他說他的作法是收10盤細胞的上清液(200ml)濃縮後全部加到12well的""一個well""
  這樣可以有90%以上的效率

  我聽了差點昏倒，養那麼多293T、離心濃縮如此的耗時
  卻只能感染一個12well的"一個well"???????????!!!!

  不曉得大家是否能給我一些建議
  還是adenovirus會比較好?

   謝謝

  謝謝你!!!

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◆ From: 140.116.253.121
※ 編輯: aggaci          來自: 140.116.253.121      (10/15 00:54)
推 conective:問一下那個實驗室有沒有測titer跟算過M.O.I?
→ conective:另外是說那個實驗室感染的也是neuron嗎？
推 conective:你的neuron是你自己作分化的嗎？其他95%是什麼神經細胞
→ aggaci:他們記得是有...不過我忘了MOI是多少了 是primary neuron
→ aggaci:保守估計90%以上幾乎都neuron吧
→ rimeni:adenovirus效率會不會高一點?
推 allisa:我記得看過PAPER說neuron要用adenovirus效率比較高
推 mandible:濃縮完之後可以放大阿~~