[求救] 想表現EGFP

[hino610325 (Syu)]

最近剛做完一連串DNA subcloning的實驗

做的是基本款實驗

miniprep

限制酶切 + 電泳 (BamHI+XbaI)

ligation + transformation

限制酶切 + PCR



用的plasmid是pcDNA3-eGFP

因為老師一時心血來潮

想要把GFP表現出來給我們看

表現用的plasmid是BL21(DE3)

clone進去之後拿去養卻沒看到什麼結果



請問板上各位前輩

這可能是哪裡出問題？

因為我還是個初心者

我只能想到一開始實驗用的gene真的是eGFP嗎

我也只能想到用定序的方法確認...



麻煩各位前輩提供一些看法~謝謝~

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◆ From: 163.25.118.166
推 dodomilk:定序啊
推 Realthugz:bl21是菌株 不是plasmid...
→ Realthugz:所以vector是甚麼 promoter是甚麼
→ Realthugz:start/stop codon? frameshift?
推 HEK293:eukaryotic promoter，pcDNA3的話
推 conective:送進細胞看看吧?
→ hino610325:vector是pcDNA3
→ hino610325:promoter是用T7p
→ hino610325:不清楚老師為什麼用T7p…切口前面剛好有一段T7的序列
→ sandra12:你有加inducer嗎
→ hino610325:老實說這個實驗是老師做了之後告訴我們結果
→ hino610325:原本是希望我們想想看，不過原po才疏學淺.....-.-
→ hino610325:應該是沒有加inducer，老師在講解的時候沒有特別提到
推 icome:沒有加當然不會大量表現
推 HEK293:ㄜ...................