[求救] 一個 100 mm 的 dish 可以養多少細胞呢？

[Tendin1015 (Tendin)]

第一次做細胞實驗，實驗室之前也沒有人做過細胞實驗，

所以我想問問各位前輩，進行正式實驗時，一個 dish

裡面可以養到多少細胞呢？因為之後還要跑 western，

不知道怎麼樣的細胞數會比較合適。


另外就是一個 dish 裡面需要含有多少體積的培養基呢？

而在細胞 lysis 時，需要加多少 lysis buffer 比較好呢？


麻煩各位前輩指點，也祝大家實驗順利。

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◆ From: 1.175.86.168
推 FireHell:不要養到全滿就好，體積大概5000~20000cells/mL去換算
→ FireHell:實驗前後細胞密度要一致
→ FireHell:以10 cm dish而言，通常加10~12 mL medium
→ FireHell:lysis buffer的部份要看廠商提供的protocol
→ FireHell:一般而言，細胞越大，密度越低；細胞越小，密度越大
→ blence:無論是seeding前或收細胞,上面的細胞濃度至少了一個數量級
推 conective:http://tinyurl.com/yg3lb9n
推 conective:http://tinyurl.com/2eoa7d4  google cell culture
→ Tendin1015:我想用 3x10^6 顆不知道會不會太多?
→ Tendin1015:因為我的細胞在 96-well 可以 5x10^4 cells/well
→ Tendin1015:謝謝 conective，這對我很有幫助。
→ Tendin1015:可是因為我的試驗物質有點昂貴，我想說能不能省一點改
→ Tendin1015:用 5~6 ml 的 medium 呢?
推 mandible:3三樓你很有錢喔!我都只加6ml而已!!
→ mandible:你要看你的細胞大小.來決定你的western量.應該會定量吧!
→ Tendin1015:恩，會定量。 所以 medium 用 5 ml 應該也 OK 吧?
推 FireHell:抱歉我最前面打錯了，要加一個0。50000~200000 cells/mL
→ FireHell:我的sample也超貴(1 mg => 10k)，但是你還是要統一細胞密
→ FireHell:度，我指的是你應該跟前面的任何實驗統一密度
→ FireHell:因此你medium少細胞也會少，western需要不少的細胞來提供
→ FireHell:足夠的蛋白，以我的Hep 3B為例，我濃度是50000 cells/mL
→ FireHell:1盤10 mL，CONTROL都一次重三盤全收，大概可以壓十次
→ FireHell:每次是50 ug
→ alicialai:這些問題實驗室前輩應該都有protocol吧~ 可以詢問看看~
→ alicialai:喔不好意思沒看到您的第一句話~ 抱歉~
→ alicialai:可以去問問隔壁實驗室?
→ alicialai:我養RAW cell, 10cm dish, ~90 confluent約3x10^7 cell