[求救] cleavaged Caspase3的western

[aken740127 (~^0^~)]

 問題:跑western blotting的時候，
      以cell signaling的抗體anti caspase 3 (#9662)[1:1000 4度C o/n]
      可以看到很明顯的pro-caspase 3 (35 kDa)
      以及很微弱的cleavaged caspase 3 (17 kDa)

      但是將membrane切開，
      單獨壓anti caspase 3(cleavage form)(#9664)[1:500 4度C o/n]，
      訊號卻時有時無....= =

      後來更改的條件有: protein loading增加為150 ug, 1'Ab 1:250 o/n
      但都還是沒有改善

      爬文發現好像大家的caspase 3都不太難壓
      想請問有人有跟我一樣的狀況嗎??
      或者有其他推薦還不錯的牌子可以試試
      謝謝大家抽空看看我冗長的文章~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.125.66
推 mesenchymal:之前我#9662,1抗1:1000,protein<60 ug,還是能壓到
→ mesenchymal:不過有些細胞訊號或較弱沒錯 我都用BSA blocking
→ mesenchymal:5%牛奶之前試過也OK
→ aken740127:恩恩 blocking的方式也試過
→ aken740127:原先是用5%脫脂奶粉也壓不太出來
→ aken740127:其他的band有比較清楚  不過caspase 3還是老樣子
→ aken740127:感覺壓caspase3前還要看運氣好才會有一點點訊號...冏rz
推 im9527tw:Invitrogen的Caspase 3很好壓,40ug 1:1000 o/n ,pro跟cl
→ im9527tw:都很明顯
推 tonbushai:但是說不定真的沒有刺激apoptosis吧><??
→ g010377:要不要先確定apoptosis有無被indeced?
推 mesenchymal:要不要跑個PI/Annexin V flow 確認看看
→ aken740127:但是PARP有被切割  應該是有活化apoptosis??
→ aken740127:PARP不是會被caspase 3切割嗎??
→ f9361046:PARP有被切...就有apoptosis....有些廠牌caspase3很難壓