[求救] MTT assay 處理組數值高於控制組

[unwell ( )]

已經爬過文了沒看過有人問


請教板友

我做的試驗是在caco-2貼附後 加入某藥品進行攻毒

另外添加兩個菌數的某菌

想看該菌可否使藥品對caco-2的傷害降低


結果

control是沒加藥品也沒加菌 OD值平均視為100%

只加藥品組OD值是控制組的80% (嗯 還OK)




重點來了

只加低菌數某菌組OD值居然是control的200%!!

我想說 會不會是caco-2跟菌之間有吸附的關係 所以測MTT時也同時測到菌了

但在只加高菌數某菌組OD值是control的120%

而在藥品與菌共同treat下則都低於100%





嗚哇我該如何解釋

MTT assay結果 實驗組比control還高呢?

甚至達到200%???






補充

1. 96-well   細胞數: 2x10^4/well  100 μl/well

2. 因為有菌的處理 反應時間設定只有12h

3. 在加入MTT之前 有用200 μl PBS wash 2次

4. triplicate,  standard error挺小的




謝謝各位了~~~

※ 編輯: unwell          來自: 140.112.154.104      (12/29 17:17)
推 mesenchymal:MTT 12hr會不會太少了?
→ unwell:我是逼不得已 放到24H菌長超快細胞會死 是可以再微調看看
推 FireHell:加入MTT之前不可以用PBS wash，會把酵素洗掉
→ FireHell:很多人會犯這個錯誤
→ unwell:MTT是加在medium裡處理細胞反應4h 不是測那4h產的酵素?
→ unwell:如果會洗掉酵素 那吸掉medium那步時不就也吸掉酵素了???
→ unwell:謝謝大家的回應
推 icome:要測的dehydrogenase在mitochondria 不會被洗掉
推 aceliang:是測MTT被mitochondria的reductase還原後變成的formazan
推 natual:樓上正解..請各位仔細去看MTT原理