→ blence:如果實驗的treatment會可能干擾NADPH pool卻不見得細胞死亡 01/01 23:18
→ blence:最保險的方法是測MTT前務必wash，免得有額外因素干擾 01/01 23:20
※ 編輯: FireHell 來自: 140.112.218.89 (01/02 13:06)
※ 引述《APPswe (What are you doing?)》之銘言：
:
: 小弟不才 在此發表一些個人淺見
: F大提供的這篇paper中 第109-110頁提到下列兩點:
:
: 1.琥珀酸脫氫脢(succinate dehydrogenase, SDH)是細胞生長代謝產物
: 2.琥珀酸脫氫脢會分泌到細胞外 並附著在細胞膜上
:
: 作者對於這段論述並沒有提供參考文獻
: 為此 我自己查了一下生化課本
: 發現SDH是存在粒線體內膜 在電子傳遞鏈的作用中 扮演著重要的角色
: 似乎並不能算是一種代謝產物(?)
: 另外 為何在粒線體內膜的酵素會分泌到細胞外?
: 印象中在細胞凋亡時 粒線體膜的結構破裂 才會讓其中的蛋白質被釋放至細胞質中
: 假如正如作者所言 SDH會附著在細胞膜上 那其功能又為何? 生理功能又會是甚麼?
: 而SDH在細胞內又是甚麼反應的代謝產物呢?
非常感謝您提出的疑問。
其實之前在看我上一篇提供的paper時，我就已知道SDH是在粒線體內膜上，
因此對他的推論存疑 (在上一篇的推文我有提到)。
剛剛去查了一下，終於找到最可能的原因了！
http://0rz.tw/Gdmmf
第89頁提到，MTT跟粒線體的電子傳遞鏈反應其實只佔"小"部份
還很可能跟細胞"質"的NADH、NADPH等物質反應，我想wash非常有可能把這類物質洗掉。
那到底該不該wash呢？第90頁有提到是「不需要」wash的。
我想這也是合理的，細胞質中的NADH、NADPH同樣代表著細胞活性。
同時也可解釋那篇殘體paper中wash掉的上清液吸光值為何沒有增加，
我想是因為wash掉的是substrate，而不是enzyme。
從酵素動力學來看，substrate不足會影響對enzyme活性的判斷，
並直接反應在最終的實驗結果與統計差異，這也是我之前遭遇的困境。
(可看我之前PO的求救文)
當然也代表我在第一篇的推文指出會把酵素洗掉的這點是不夠嚴謹的，
應該說可能會把許多可與MTT反應的物質洗掉，特此更正！
希望這篇可以解決大家的疑惑:)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.218.89