[討論] 跑WB的蛋白質樣品-20可以保存多久?

[raiyu (ラルクは信仰)]

想請問一下 大家的樣品sample buffer處理後
通常冰在-20可以保存多久??
另外通常可以結凍解凍幾次??

因為最近WB一直作不出來
同樣的sample 之前都還跑得很清楚
但最近(12月) 不論transfer o/n
重配1抗2抗 或 1抗 o/n
甚至loading 100ug 去跑 還是跑不出來
不論是磷酸化的蛋白或是total的都跑不出來
都快去撞牆了

WB作不出來的可能原因實在太多了
想請問大家的經驗
希望能稍為排除一下可能原因
謝謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.77.65.129
→ a001ou:通常我放3個月就會明顯感受到訊號減弱 但有神人一年樣本
→ a001ou:跑起來還是很威 只能說看個人
推 dodomilk:每一部作control試試看原因吧 最近還碰過機器壞掉的
推 owl628:想順便請問大家,大家覺得protein用SB處理過後保存比較好,還
→ owl628:是直接凍在-80,要跑WB前再用SB處理比較好,謝謝~
推 martyrtitan:SB和加熱處理後 protein都變性 而且如果有加inhibitor
→ martyrtitan:理論上是還滿穩定的...
→ martyrtitan:我現在是先定量一批跑internal control
→ martyrtitan:如果沒變 那我就分管以sample buffer處理後冰-20
推 huhu126:有沒有一個確定的positive control可以用?
→ huhu126:另外,是只有你或是少數人做不出來,還是所有人都這樣?
→ huhu126:是的話,check一下2抗及substrate
推 lovenainai:加laemmli buffer煮過之後放-70至少可以放一年
→ raiyu:了解~ 謝謝各位的回答
推 windyflyer:可以藉標題問SB是啥嗎@@?
→ raiyu:SB=sample buffer