推 leoblack:可以考慮加一點pfu做proof reading,就很好用了 02/04 19:20
推 aceliang:太長的話還是別Taq吧 02/04 19:57
推 nixo:用phsion 02/04 20:17
推 nhxcyge:我現在是用fermentas的CloneJET PCR cloning kit 02/04 20:55
→ nhxcyge:是用blunt end ligation，所以可用phusion等不易出錯的 02/04 20:55
→ nhxcyge:enzyme. 太長的insert用taq很不保險~ 02/04 20:56
→ jk15:phusion +1 02/04 21:33
→ huuban:phusion +1 或至少 blend Taq 02/04 22:05
→ rimeni:Sigma AccuTaq LA我做5kb PCR沒問題 02/04 23:21
→ josephkokomo:你會不會是clone toxic的protein 有遇過在clone 02/05 10:44
→ josephkokomo:toxic protein到非表現型E. coli 只有mutate的才有 02/05 10:45
→ josephkokomo:toxin時到DH5a時 只有mutate的才會長colonies 02/05 10:47
→ blence:樓上,DH5a其實不是"非表現型E. coli",它還是會表現你的蛋白 02/05 13:58
推 bonbon0417:用Pfu ultra 02/05 21:09
→ shenhsu:你所謂的mutate了是什麼? 跟database序列有4個不符? 02/08 09:42
→ shenhsu:有時候是物種差異 如果不同template都那4個不同 就是SNP啦 02/08 09:45
推 dennisyoung7:或是alternative splicing 02/10 01:20
推 windyflyer:請問你的產物大小多少呢?我的經驗4.7k用phusion還ok 02/15 13:18
→ windyflyer:超過的話 我推薦Roche一組expand long template PCR 02/15 13:18
→ windyflyer:kit 名稱我忘了 但是它號稱可以P到20K 我自己那時候是 02/15 13:19
→ windyflyer:來P6.2K的東西 定序OK送細胞測活性也OK唷 不過ROCHE那 02/15 13:19
→ windyflyer:組是taq+具有proof reading的enzyme就是了 02/15 13:20