參考Robak和Gryglewski (1988)
以 PBS 配製 60μM PMS phenazine methosulfate
468 μM 之 nicotainamide adenine dinucleotide (NADH)
150 μM之nitroblue tetrazolium (NBT)
然後取 250 μL sample (conc. 0.1~4 mg/ml)與等體積 PMS、NADH、NBT mix
避光靜置 5 分鐘再去測 560 nm
吸光值愈低表示其清除超氧陰離子能力愈強
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做了 3 組-
(1) backgroup
>怕樣品背景值的影響
樣品 + PBS = 無顏色
(2) NBT-sample reaction
>因為怕樣品直接會與 NBT 反應
樣品 + NBT + PBS = 無顏色 (非常微淡的 NBT 顏色)
(3) experimental group
>無言的結果.........
樣品 + PMS + NADH + NBT = 瞬間顏色超深，劑量越高顏色越深 (紫色)
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問題來了....
這實驗之前做了 DPPH 劑量跟清除力呈正比
做這個實驗，劑量跟清除力呈反比
問題在於我做了兩次
(1) 先加樣品再加後續試劑= 結果顯示劑量和清除力呈反比
(2) 於是換個方式，先加 PMS NADH NBT 最後加 樣品= 結果一樣....
(3) 很神奇的是...PMS + NADH 是產生 superoxide 讓 NBT 產生反應 顏色變深
結果發現樣品加下去的瞬間就讓 mixture 顏色變深，隨著濃度越高 顏色越深
高過 control... 超怪
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請問有神人遇過這種事情以及解決方法嗎?
謝謝!
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