推 TAKONA:沒有selection嗎？ 02/28 21:48
→ begrace:沒有耶，因為只是暫時性表現而已 02/28 21:49
推 icome:transient transfection效果都很差 做成病毒才真正有效果 02/28 22:20
→ icome:不知道為啥 中研院這系統很tricky 02/28 22:21
推 icome:篩成stable會有效 但會比病毒感染差 02/28 22:23
→ icome:還有feedback只能參考 自己做常常都不會到那個效率... 02/28 22:25
→ begrace:謝謝樓上! 02/28 23:25
→ begrace:我再試試看其他組，或著直接做lenti virus試試 02/28 23:25
推 liuse:它每個gene應該都有至少五組plasmid 02/29 02:49
→ liuse:建議全部買來試 02/29 02:50
→ liuse:另外用lentivirus效果真的才會好 不然就用puro篩吧 02/29 02:51
推 dragonjaff:transient transfection +puro 細胞會死一大票 02/29 03:20
→ dragonjaff:等篩成stable又要一段時間 建議你還是直接包lentivirus 02/29 03:21
→ dragonjaff:原po的狀況跟我一樣 相信我 不要試了 直接包病毒最快 02/29 03:23
推 liuse:不用篩stable阿 把存活的收下來壓western就好了 02/29 04:42
推 Realthugz:transient效果難拿捏 KD效果每個clone都有差 02/29 20:03
→ begrace:今天跟老師討論，他提到實驗室之前也有人訂過中研院的 02/29 23:06
→ begrace:shRNA，並強調之前的人有用transient的方法做成功過.... 02/29 23:09
→ begrace:謝謝各位的意見，我會再試試 02/29 23:13
→ blood321:我是用Nucleofector 去轉染 effiency還頗高! 03/01 09:50
推 puec2:嘖嘖 還有人在跟中研院的shRNA奮戰 03/01 12:52
→ puec2:用RNAi比較快啦 03/01 12:52
→ sancra:transient要注意protein half life的問題(之前被陰很久) 03/01 20:45
→ begrace:@@ 樓上上是指中研院的shRNA不好做嘛? 另外protein half 03/01 21:40
→ begrace:life是指要先確認這個蛋白質在細胞內會表現多久嘛? 03/01 21:41
→ sancra:因為shRNA是degrade mRNA，所以新的protein不會做出來 03/02 09:17
→ sancra:但舊的protein還會在，那舊的protein要多久會自然被degrade 03/02 09:18
→ sancra:掉，你可能要查一下，因為transient進去的shRNA效用也不久 03/02 09:19
推 leoblack:樓上good point!!! 03/02 14:31
推 Realthugz:就是sancra說的那樣 才會做virus比較好... 03/02 15:38
→ Realthugz:transient的window其實可以很小 被你觀察到是賺到... 03/02 15:40
→ begrace:瞭解，謝謝大家給的資訊:) 03/02 22:40
推 puec2:如果不是需要stable clone, siRNA比較快啦。真的。 03/07 15:11