推 joseph103331:要做IP喔 用你的蛋白質IP hybridize HA 03/11 00:12
→ joseph103331:但要做denature form的IP 不然會無法確定是binding還 03/11 00:13
→ joseph103331:是共價修飾 03/11 00:13
我最近利用IP-Western在看一個protein是否有被ubiquitination
因為是這方面的新手，實驗室的成員也比較不懂這塊，所以上來請教有經驗的各位該怎
麼從我的data中判讀它是否有被ubiquination，先謝過大家～
最初，
是在MG132 treatment之後發現我的target protein表現量明顯增加，於是懷疑它可能會
被ubiquination。
於是之後我在細胞中同時over express我的target protein和HA-Ub，跑了Western
hybridize 我的protein，原本期望會看到protein因為被加了Ub而出現multiple band或
是smear的現象，但是卻沒有。而IP-Western正在做，預備IP-target protein，hybridize
Ub。
請問如果我的target protein是有被加上Ub的，那麼它在一般Western blot中就看得到
smear了嗎?還是要在IP之後才看得到呢?
(註：我的protein很小，不到20 kD)
謝謝大家
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