推 jabari:1. 跑膠或單純拿切膠的pcr產物run meltingcurve 03/14 04:10
→ jabari:2.taqman用probe 不會跟dimer有關係。melting curve HRM強 03/14 04:11
→ jabari:在可以作SNP或hetero/homezygotes預測分型 03/14 04:12
雖然real time PCR的強項在於定量
但是蔽實驗室也把它拿來作PCR檢測時的double check
最近操作上有壹些問題想跟各位前輩討論討論
第一是關於primer dimer的問題
如果melt curve的兩個peak出現在70及80度左右，80度的訊號較弱，
是否80度的部分應為非特異性產物而不是primer dimer?
印象中primer dimer應該是在溫度較低的時候出現，不知道這樣的觀念是否正確
第二是使用的reagen問題
taqman的特異性是高於sybrgreen的，這個是肯定的
但是有產品專員表示taqman不會產生primer dimer，所以不需要確認melting curve
在我的認知是taqman特異性高，確實不容易產生非特異性產物，但是也不是都不會出現
而且melting curve應該不是只有拿來看primer dimer的問題吧~
請問各位前輩關於以上兩個觀念是否正確呢?謝謝指教!
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偶開天眼覷紅塵
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