Re: [求救] FPLC injection 已修改並詳述步驟

[betouched (上上下下)]

update 資訊與方法,我的FPLC都沒有出現peak 不知道問題在哪裡

用打的描述方法有點困難,所以我將照片上傳到dropbox

http://0rz.tw/lHY8Y 這是我打出來的圖,UV是那很雜的那條,雜訊很大,沒轍

http://0rz.tw/oCOoA 方法前半段

http://0rz.tw/YoFue 方法後半段

http://0rz.tw/aQpOI Gradient 曲線

http://0rz.tw/hVfWp 前人留下來的圖,打出來應該要長這樣

我是在run方法之前.就先inject sample

我手動將 injection valve 轉到 inject 然後打1ml 0.2mg/ml 的sample

再轉到 load 然後按下 run

ps.由於實在都沒有peak 所以我連,先 load 在 inject 都玩過了

Setup Lamp Run Time 顯示

Hg 22218h

其實我一直認為是 Lamp 問題,使用說明書上寫的是 run time

我的認知是,燈泡使用時間,所以我認為Lamp已經該換了

可是我這邊的博後

堅持說他之前才換過,那是倒數時間

這個博後,我真的有說不完的想罵他的話

覺得還是自救比較快

使用的儀器

Pump P-920
UPC-900


※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言：
: 之前用FPLC的學長姐不見了之後我才進實驗室
: 現在一個人在努力學習怎麼用這個儀器
: 儀器 AKTA FPLC
: 軟體 Unicorn
: Column : resource Q 1ml
: Method:沿用前人的 method
: 1. wash by water
: 2. wash by protein solution AB for 20 min
: 這期間我用 protein solution A 洗了 sample loop (2ml)
: 然後 inject sample into sample loop for 1 ml (0.25mg/ml)
: 有確定此時 InjectionValve 是block住的
: 3. injection
: 這裡螢幕上顯示不是很明瞭
: 0.02min InjectionValve inject
: 0.02min Block Sample_Injection
: 0.02min Base Volumn
: 2.02min End Block
: 2.02min InjectionValve Load
: 2.02min End Block
: .
: .
: .
: 4. Gradient B from 0-100% for 40 min
: 標準品應該在20分鐘左右出來<可是UV還是保持在0上下跳動
: 5. 哭哭
: 一個人看著 FPLC 使用說明書,東弄弄西弄弄得,真是頭大,來個人幫幫我吧 哭哭
: ◆ From: 147.126.101.168
: 推 bluep:簡述一下你的column和method, 大家才有辦法幫你找問題        03/16 14:32
: ※ 編輯: betouched       來自: 147.126.101.168      (03/17 02:10)
: 推 iosteven:這一台操作 很簡單= ="你的動相 梯度 方法 跟目的等資訊   03/17 13:39
: → iosteven:要說明白才可以幫你^^，基本上設定好固定時間收吸收峰     03/17 13:40
: → iosteven:的樣品，是最簡單的目的，是要純化或分Fraction.....      03/17 13:41

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 147.126.101.169
→ trumpet:這樣的圖就算有peak你也看不出來，看起來像是燈沒開的樣子
→ trumpet:method的部分沒看到設定波長的選項?!
→ betouched:這就是詭異的地方,找不到任何地方可以設定波長
→ betouched:說明書只有講波長根據什麼燈<儀器部分只告訴我
→ betouched:這是Hg燈,找不到地方有顯示波長,Method不知道哪裡可以設
→ betouched:對了,Lamp顯示 on
→ Marriott:UPC-900好像波長不能變,unicorn操作介面就沒有波長的選項
→ Marriott:UV-900就可以
→ betouched:看來應該是UV壞了 QQ
推 alaric:過大量的水, 到穩定值, 再過buffer + 1M NaCl, 洗到穩定.
推 alaric:請確定 Inj mode VS. Load mode , 何時才可以Load Sample?
→ alaric:你要把Inj及Load mode的流路圖看懂, 就知何時該Loading.
→ alaric:另外, 你要確定你的A, B buffer 沒配錯及放對管子.
→ betouched:謝謝樓上提醒, ^^
推 missal:上次我們實驗室lamp掛點之前也是有這種情況
→ missal:如果那些雜訊不是因為空氣的話 確認一下fraction collector
→ missal:裡有沒有液體? 另外如果是lamp的問題我們之前打去GE問過
→ missal:你可以用熱水洗洗看...或是用1M NaOH看看....