[求救] 大家的genomic dna都很容易degrade嗎

[sylvialalala (sylvia)]

之前要p genomic dna一直p不出來，後來以新鮮抽dna 的有p出來一次10k

但下一次要做的時候想要做正對照，p出來卻是smear!!!

做法跟前一次完全一樣

唯一想到的就是dna degrade了

可是中間我也才冷凍解凍一次而已.....

請問大家的genomic dna有那麼容易degrade嗎?

另外，第二次我用的是分裝後的dna，有可能是因為分裝不均勻嗎？


(我是用labturbo這套kit抽的，elute在cceb裡面）

謝謝


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◆ From: 61.230.50.234
※ 編輯: sylvialalala    來自: 61.230.50.234        (04/04 20:15)
推 crazybrian:鹽濃度也會影響  可以分批稀釋去P看看
推 kenseifan:我之前GENOME DNA放兩年也還很好用
推 aggaci:smear-->降低Mg2+濃度超有效!
→ sylvialalala:謝謝樓上！！我明天會試試看！！
→ schmitt:.....稀釋10倍看看
推 stormcorn:PCR之前DNA要定量跟稀釋
→ sylvialalala:今天試過了鎂離子還是p不出來～我dna只有下30 ng而已
→ sylvialalala:這樣還要稀釋嗎？
→ WinnieDad:Genomic DNA一般情況來說不是那麼容易degrade，除非存放
→ WinnieDad:的buffer有問題。用其它組成功過的primers若還是p不出來
→ WinnieDad:，可能就真的是DNA本身發生問題了。你PCR的band是smear
→ WinnieDad:還是faint？faint還有救，smear就…