[求救] HIS蛋白在beads上下不來

[abcm1042 (那就好)]

  想請問各位大大

  我的蛋白最近都在Ni beads上 無法下來

  我的wash buf 是用 50mM NaH2Po4 300mM NaCl 10mM imidazole

     elution buf   50mMNaH2Po4 300mM NaCl 250mM imidazole


    蛋白是由pet28b系統在BL21中產生的

  之前都沒有問題 但最近蛋白大都在beads上沒有辦法elute下來

  imidazole濃度從250mM~500mM都試過

  減少beads binding的時間 從之前的4度C o/n 室溫30分鐘

  也還是很多蛋白在beads上

  想請問我還可以用什麼方法得到elute的蛋白

  因為我是需要看protein interaction 所以太破壞結合反應的方法可能不行

  謝謝

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◆ From: 140.121.179.203
推 mckendri:先試看看imidazole有沒有壞掉吧