推 alaric:2. 大量濃縮, 過desalt column 04/13 01:29
推 lyu0001: 補充樓上-濃縮後再加buffer稀釋再次濃縮 04/13 18:07
→ lyu0001:細胞測試用記得0.22um過濾 04/13 18:08
大家好呀 !
小弟使用affinity column進行蛋白質純化
蛋白質分子量 11 kDa
elute後蛋白質溶於buffer(20 mM Tris-Hcl;500 mM NaCl;1 mM EDTA;50 mM DTT)
欲去除雜蛋白以及DTT和鹽類並進一步濃縮.凍乾以便後續的細胞測試
實驗室有3.5K透析膜. 凍乾機. vivaspin(5K 和 30K)
目前計畫:1.以30K vivaspin過濾去除雜蛋白
2.透析去除DTT和鹽類
3.使用5K vivaspin濃縮蛋白液
4.Bradford法測定蛋白濃度並分裝每次使用的量
5.凍乾
6.回溶.細胞測試
請問這樣實驗流程的安排是否恰當 ? 或有更好的建議嗎 ?
欲進行細胞測試,請問我要使用什麼溶液將凍乾的蛋白粉末回溶呢 ?
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